小量全血基因組DNA快速提取試劑he
本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等有毒試劑，也無需進行耗時的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學實驗。小量全血基因組DNA快速提取試劑he
FlashPure Blood Genomic DNA Kit
血液基因組 DNA 提取試劑he
（離心柱型）
小量全血基因組DNA快速提取試劑he
目錄號:40011
產(chǎn)品內(nèi)容：
產(chǎn)品成分 | 40011-50（50 次） | 40011-100（100 次） |
平衡液 | 5ml | 10ml |
緩沖液 BB | 10ml | 20ml |
結(jié)合液 CB | 11ml | 20ml |
抑制物去除液IR | 25ml | 50ml |
漂洗液WB | 13ml | 25ml |
洗脫緩沖液 EB | 10ml | 15ml |
蛋白酶 K 溶液 | 1ml | 2x 1 ml |
DNA 吸附柱和收集管 | 50套 | 100套 |
10x 紅細胞裂解液（贈送） | 10ml | 20ml |
自備試劑：
無水乙醇，RNase A（可選）
保存條件：
室溫（15~25℃）
蛋白酶K，室溫可保存6個月，4℃保存 12個月，~20℃保存 2 年。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準
產(chǎn)品簡介：
適用于從新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA，也可以提取白膜層和血凝塊。
本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無需酚氯仿等有毒試劑，也無需進行耗時的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無蛋白、核酸酶污染，可直接進行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學實驗。
產(chǎn)品特點：
1. 簡便快速：30min內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA。
2. 安全無毒：無需苯fen/氯仿抽提。
3. 高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量 200µl全血可提取出 3～6µg 基因組 DNA，
4. 高純：OD260/280=1.7～1.9，長度可達 30～50 kb，可直接進行 PCR、酶切和雜交等分子生物學實驗。
注意事項：
1. 如果結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。
2. 開始實驗前將需要的水浴先預熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>
3. 為了zui jia效果，zui hao使用新鮮血液標本或者4℃存放少于3天的標本，不要使用反復凍融超過3次的標本，否則會嚴重降低產(chǎn)量。
4. 不同樣品尤其疾病樣品中白細胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個體差異也可能非常大。
5. 洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫，但應該確保批pH大于7.5， pH過低影響洗脫效率。用水洗脫DNA應該保存在－20℃。DNA如果需要長期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能下游酶切反應，使用時可以適當稀釋
操作步驟：
第一次使用前，請先在漂洗液WB中加入指ding量無水乙醇，詳見瓶身的標簽。提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進行。
1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入100μl平衡液，12,000rpm離心1min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。
（請使用當天處理過的柱子）
2. 取 200μl新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入1.5ml離心管。
▲如果血液起始量小于200μl，則用1×PBS補足到200μl。
如果起始量介于200μl-300μl之間，則需要按照比例增加試劑用量。
如果起始量介于300μl~1 ml之間，則需要先進行紅細胞裂解操作: 將10x紅細胞裂解液用滅菌水稀釋到1x，然后在樣品中加入3倍體積的1x紅細胞裂解液，顛倒混勻，室溫放置10 min，期間再顛倒混勻幾次。 13,000rpm離心20 sec(對于1.5 ml離心管)或2,000~3,000rpm離心5 min(對于15ml離心管)，吸去上清，留下白細胞沉淀（如果看到的是大部分的紅色細胞團，則再次加入3倍1x紅細胞裂解液，重復裂解一次），加入200 μl 1× PBS，振蕩至che底懸浮。
▲提取凝固血時需要在操作前用槍頭搗碎血凝塊后按照正常步驟進行。
▲如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細胞為有核細胞，因此處理量僅用5~20μl，可加1×PBS補足到200μl后，進行下面的裂解步驟。
3. （可選，一般不需要）如果需要去除 RNA，可向200μl的血液樣品中加入5μl RNase A(100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫放置5~10min。
4. 加入20μl蛋白酶K溶液，充分振蕩混勻。
5. 加入200μl結(jié)合液CB，充分振蕩混勻，70℃放置10min，期間顛倒混勻幾次，溶液應該變清亮，但顏色偏黑。（如果未變清亮，請延長時間）
6. 冷卻后加100μl無水乙醇 (或異丙醇)，充分振蕩混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。
7. 將所得溶液和絮狀沉淀加入一個DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm離心1min，DNA被吸附在膜上，倒棄濾液。
8. 加入500μl抑制物去除液 IR，13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。
9. 加入600μl漂洗液 WB（請檢查是否已加入無水乙醇），13,000rpm離心30sec，倒棄濾液。
10. 重復步驟9一遍。
11. 將DNA吸附柱放回空收集管中，13,000rpm離心2min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
12. 取出DNA吸附柱，放入一個干凈的1.5ml離心管中，向吸附膜的中央加入100μl洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在80~100℃水浴中預熱可以提高產(chǎn)量）， 室溫放置3~5min，13,000rpm離心1min。
▲可將第一次洗脫所得的DNA溶液重新加入離心柱中，室溫放置 2min，13,000rpm離心1min。可以提高濃度10%左右。
13. DNA可以存放在 2~8℃，如果要長時間存放，可以放置在-20℃。
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