超純?nèi)俁NA快速提取試劑盒
適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE等。超純?nèi)俁NA快速提取試劑盒
FlashPure Blood Total RNA Mini Kit
超純?nèi)?/span> RNA 提取試劑盒（離心柱型）
超純?nèi)俁NA快速提取試劑盒
目錄號(hào)：91215
產(chǎn)品內(nèi)容
產(chǎn)品成份 | 91215-50（50 次） |
10X 紅細(xì)胞裂解液 RLB | 25 ml |
裂解液 RL | 50 ml |
去蛋白液 RE | 25 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入指ding量無(wú)水乙醇） |
70%乙醇 | 9 ml（需加入指ding量無(wú)水乙醇） |
RNase-Free H2O | 10 ml |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
自備試劑
無(wú)水乙醇、β-巰基乙醇
保存條件
室溫（15 ~ 25℃）下，存放 12 個(gè)月，不影響使用效果。
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
適用于快速提取新鮮血液的總RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、RACE等。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 高質(zhì)：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
2. 高效：提取全過(guò)程僅需 20 min！
操作步驟
提示：
①所有離心步驟均需要在室溫（15 ~37℃）下進(jìn)行。
②第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指ding量無(wú)水乙醇。
③操作前，先用 RNase-Free H2O 將 10X 紅細(xì)胞裂解液 RLB 稀釋到 1X。
1. 在適合大小的 RNase free 離心管中加入 1 體積（0.5-1 ml）各種抗凝劑新鮮血液 (先顛倒混勻后)和 3 體積的紅細(xì)胞裂解液 RLB，顛倒混勻，可輕彈管壁，確保混勻。
2. 室溫放置 10 分鐘（期間應(yīng)該顛倒輕彈混勻數(shù)次幫助裂解紅細(xì)胞）。
注意：如果 RNA 降解嚴(yán)重，可在冰上裂解，時(shí)間可以長(zhǎng)一些以充分裂解。
3. 12,000 rpm 離心 20 秒，倒棄紅色上清，并小心的盡可能多的吸棄上清
（注意不要吸到管底的細(xì)胞團(tuán)），留下完整的管底白細(xì)胞團(tuán)。
注意：離心后在管底應(yīng)該見到白色的白細(xì)胞團(tuán)，也可能有一些紅細(xì)胞殘片和白細(xì)胞團(tuán)在一起，但是如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，說(shuō)明紅細(xì)胞裂解很不充分，應(yīng)該再加入紅細(xì)胞裂解液，重懸后重復(fù)步驟 2，3。
注意：上清盡可能che底吸棄，殘留過(guò)多會(huì)稀釋裂解液，造成裂解異常，產(chǎn)量純度降低。
4. 渦旋或者輕彈管壁將白細(xì)胞沉淀wan全松散重懸，加入 1 ml 裂解液 RL，用移液槍反復(fù)吹打，充分裂解細(xì)胞。
5. 將勻漿樣品劇烈震蕩混勻，在室溫（15 -30℃）條件下孵育 5 min，使得核酸蛋白復(fù)合物wan全分離。
6. 每1 ml裂解液 RL 加 0.2 ml 氯仿，蓋緊樣品管蓋，劇烈振蕩 15 sec，并在室溫下放置2min。
7. 12，000rpm 離心 10 min，樣品會(huì)分成三層：下層有機(jī)相，中間層和上層無(wú)色的水相，RNA 存在于水相中。水相層的容量大約為所加 RL 體積的 60%，把水相轉(zhuǎn)移到新管中，進(jìn)行下一步操作。
8. 向水相中加入等體積 70%乙醇，吹打混勻。
9. 每次轉(zhuǎn)移≤700 μl 水相混合物至一個(gè) RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 離心1 min，RNA 被吸附在膜上，棄濾液。重復(fù)此過(guò)程，直到溶液全部上柱。
10. 加500μl去蛋白液 RE，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。
11. 加入500μl漂洗液RW，13,000 rpm 離心 30 sec，棄濾液。
12. 重復(fù)步驟 11。
13. 將 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 離心 2 min，che底除去膜上殘留的乙醇。
14. 取出 RNA 吸附柱，放入一個(gè)新的 1.5 ml RNase - free 離心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加30-50μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加熱可提高產(chǎn)量），室溫放置1min，13,000 rpm 離心1 min，管底即是RNA溶液。
15. 提取的RNA可直接用于下游實(shí)驗(yàn)，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。
相關(guān)產(chǎn)品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (適用于所有qPCR儀)
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