土壤提取試劑的原理與操作方法看完本篇就明白了
更新時間：2021-09-15 點擊次數(shù)：1848次
土壤的成分包括礦物質(zhì)、粘土等無機物、植物及植物的殘骸、腐殖物質(zhì)等土壤有機物以及在土壤中存在的微生物。
從土壤中提取的DNA，是微生物、動植物殘骸等的總DNA，同時，腐殖物質(zhì)的性質(zhì)與DNA很相似，DNA提取過程中會將腐殖等物質(zhì)一起純化，采用傳統(tǒng)的DNA提取方法來除去腐殖物質(zhì)等抑制因子是十分困難的。
而這些腐殖物質(zhì)會抑制聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)及限制性酶切等。因而，從土壤中提取DNA，腐殖物質(zhì)等抑制因子的除去干凈是重中之重。
下面讓我們來了解一下土壤提取試劑的原理與操作方法吧
土壤樣品加入懸浮緩沖液Buffer C1，并加入玻璃珠與腐殖酸吸附劑Buffer C2，渦旋使土壤充分重懸，腐殖物質(zhì)充分釋放，讓吸附劑有效吸附腐殖酸。
再加入高效的裂解液Buffer C3并渦旋在玻璃珠的摩擦作用下，裂解土壤中的所有生物包括G+細(xì)菌、酵母菌、真菌、藻類、線蟲甚至真細(xì)菌的孢子、芽孢、動植物殘骸等，游離DNA。
之后，再加入沉淀劑Buffer C4，離心沉淀除去土壤殘渣、吸附有腐殖酸的吸附劑、多糖多酚、絕大部分的色素等，獲得清亮的、含有DNA的上清，上清加入異丙醇沉淀獲得DNA粗品。
粗品中加入ddH2O溶解后，再加入Buffer C5離心進(jìn)一步除去腐殖酸等雜質(zhì)，獲得上清，往上清加入乙醇后轉(zhuǎn)移到硅膠純化柱中過柱吸附DNA，除去雜質(zhì)。
再加入漂洗液Buffer WB離心進(jìn)一步除去蛋白質(zhì)、腐殖酸等雜質(zhì)，加入漂洗液DNA Wash Buffer除去鹽分等。干燥柱子后加入滅菌去離子水后，離心獲得高純的DNA。
以上內(nèi)容便是本次為大家分享關(guān)于土壤提取試劑的相關(guān)信息，希望大家在看完之后能夠?qū)υ摦a(chǎn)品有更多的了解。
